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细胞培养瓶中的细胞不贴壁是什么原因

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ningxueqin 发表于 2022-1-7 20:35 | 显示全部楼层 |阅读模式
  贴壁细胞是目前细胞培养中的主要类型,它们需要吸附在支持物表面,依靠自身分泌的或培养基中提供的贴附因子才能在该表面上生长、繁殖。有时候我们会发现细胞培养瓶中的细胞无法贴壁,这是什么原因引起的呢?

  T225细胞培养瓶

  贴壁细胞培养是适应环境的一种反应,密度大于培养基的细胞会沉降在底面上,如果细胞要生存必定得改善这个环境,分泌细胞外基质,改善底面结构,然后很自然就贴附在底面上了。密度小于水的细胞会漂浮在液面上,所以不可能贴在底面上,但是如果将培养液加满,使细胞能够与细胞培养方瓶上面的壁接触同样可以贴壁。如果细胞出现不贴壁的情况,可以从以下几个方面分析:

  T175细胞培养瓶

  1、细胞的传代最重要的是胰酶处理时间:消化不够细胞本身就是成团的;若胰酶处理太久,容易造成细胞膜蛋白损伤,使细胞贴壁不紧,显微镜下观察立体感不强,严重的时候甚至会造成细胞死亡。

  2、缺少贴壁因子:血清中含有促贴壁因子,而无血清培养基工艺中由于缺少这种促贴壁因子,细胞的贴壁效果会下降很多。

  3、支原体或细菌的污染。

  4、培养液配置、储存不当,如pH值过碱,Gln量太少等原因。

  5、复苏的细胞本身状态不好,已经老化,失去贴附性。

  6、接种细胞数目太少,无法分泌足够的细胞外基质。

  7、复苏时处理速度太慢,复苏过程不当。

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